產品中心
PRODUCT CENTER
可分離式鏈酶親和素磁珠
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MMI 107 |
BcMag? 可分離式鏈酶親和素磁珠 |
2ml |
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MMI 108 |
BcMag? 可分離式鏈酶親和素磁珠 |
5ml |
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MMI 109 |
BcMag? 可分離式鏈酶親和素磁珠 |
10ml |
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如需大量訂購，請聯系我們報價！ |
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產品屬性 |
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磁珠大小 |
直徑~ 2.5 μm |
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磁珠密度 |
~10 x 107 beads/mg ( 2.5μm) |
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磁力大小 |
~40-45 EMU/g |
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磁化類型 |
超順磁性 |
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濃度 |
10 mg/ml (10mM Tris, 0.15 M NaCl,0.1% BSA,1 mM EDTA, pH7.4, 0.01% NaN3) |
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結合能力 |
生物素化BSA / 每毫升磁珠 |
>1mg/ml |
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生物素化單鏈核苷酸 |
~ 2,000 pmoles /ml |
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儲存 |
室溫運輸，4℃儲存. 不可冷凍 |
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BcMag? Cleavable Streptavidin Magnetic Beads是表面覆蓋有高純度（>97%）鏈酶親和素的二氧化硅基質的超順磁性磁珠。由于鏈酶親和素通過內置的可切割二硫鍵連接物（圖1）與磁珠連接，因此，可用還原劑（如DTT或β-巰基乙醇）從磁珠上切割并分離出鏈酶親和素-生物素化分子的復合物，而不需要像親和純化一樣，在純化后使用苛刻的洗脫試劑（如8M胍或SDS洗滌劑）洗脫目標產物（圖1）。這款磁珠經過專門設計和測試，可用于免疫沉淀、細胞分選以及從細胞裂解物或雜交反應中快速捕獲目標分子，如DNA、RNA、抗體或蛋白質等。
鏈霉親和素和生物素之間表現出的相互作用，是已知的最高非共價相互作用之一?？股锼亍㈡溍褂H和素、單體抗生物素及其類似物已成為探針和親和配體的有力工具，廣泛應用于生化分析、疾病診斷、親和純化和藥物遞送。鏈霉親和素是一種四聚體生物素結合蛋白，來源于親和素鏈霉菌，分子質量為60000道爾頓。鏈霉親和素不含碳水化合物結構，pI值較低，非特異性結合程度較低，使鏈霉親和素成為許多檢測系統的理想選擇試劑。
特點及優勢
鏈霉親和素-生物素結合系統的優勢和益處
l 極高的親和力：鏈霉親和素是同源四聚體，具有較高的生物素結合親和力，具有KD～
10?14米。
l 高穩定性：生物素結合復合物具有良好的穩定性，可抵抗極端pH值、溫度（2°C和
40°C）、極端的有機溶劑環境、變性劑（如氯化胍）、洗滌劑（如SDS）和
蛋白水解酶。
l 突出的選擇性和特異性：生物素和鏈霉親和素的相互作用具有高度的特異性，可極大降
低非特異性結合概率。
l 高靈敏度：高穩定性和特異性確保了極高的檢測靈敏度。
l 靈活性：生物素體積小的特點和顯著的穩定性被證明非常適用于結合各種分子，例如
合成聚合物、熒光團、與小分子或生物分子中的特定位置結合，從而對共軛生物分子的結構和功能施加最小的干擾。
使用鏈霉親和素磁珠的優點和益處
l 容易從磁珠上洗脫出生物素化分子--鏈霉親和素的復合物
l 快速、簡單、一步式的高通量操作過程：不需要離心柱或過濾器，或費時費力的重復移液或離心
l 極高的結合能力
l 非常低的非特異性結合率
l 可根據需要調整反應體積的大小，適用于自動化操作
操作協議
所需耗材
l Binding Buffer: 1x PBS, 0.1% BSA, pH 7.4
l 磁力分離器（適用于手動操作）：根據實驗時生物樣品的體積，使用者可以選擇一下不同型號的磁力分離器：
BcMag? separator-2可以容納兩個單獨的1.5 ml離心管(Cat.# MS-01);
BcMag? separator-6可以容納六個單獨的1.5 ml離心管(Cat.# MS-02);
BcMag? separator-24可以容納24個單獨的1.5-2.0 ml離心管(Cat.# MS-03);
BcMag? separator-50可以容納一個單獨的50 ml離心管，一個15ml的離心管，以及四個1.5ml離心管(Cat.# MS-04);
BcMag? separator-96 可以配合96 ELISA板和PCR板使用 (Cat.#MS-05).
操作過程
提示
l 一下操作過程是一個通用的親和純化操作。為了獲得最佳結果，每個用戶都應該根據所需要純化的目標蛋白確定最佳工作條件。
l 我們強烈建議用戶使用滴定法，根據粗樣品中目標生物素化分子的濃度（基于磁珠結合能力），優化每次使用中添加的磁珠數量。使用過多的磁珠會導致過高的背景，而使用磁珠的量過少會導致產量降低。
1. 將最佳添加量的磁珠轉移到離心管中。將離心管放在磁力分離器上1-3分鐘，當磁珠完全沉淀時，去除上清液。
2. 取下試管，用5倍體積的PBS buffer通過渦漩清洗磁珠30秒。將試管置于室溫下1-3分鐘。將試管放在磁力分離器上1-3分鐘，當磁珠完全沉淀時，去除上清液。
3. 重復步驟2兩次。
4. 向含有目標分子的粗樣品中加入洗滌過的磁珠，并在室溫或所需溫度下培養1-2小時（溫度越低，培養時間越長）。
提示：強烈建議進行滴定實驗以優化培養時間。因為較長時間的孵化可能會導致背景過
高。
5. 用5倍磁珠體積的PBS buffer或1M NaCl徹底清洗珠（可多次清洗），直到洗脫液在280 nm
處吸光度接近背景水平（OD 280<0.05）。
提示：添加更高濃度的鹽、非離子洗滌劑和還原劑可能會降低非特異性背景。例如，向
洗滌緩沖液中添加NaCl（濃度為1-1.5 M）、0.1-0.5%的非離子洗滌劑，如Triton X-
100或吐溫20。
6.二硫鍵的切割
提示：由于配體之間的構象不同，用戶應確定最佳工作條件，如還原劑、pH值和溫度，以切割單個配體的二硫鍵。以下是從磁珠上切割共軛的GFP蛋白的示例。
1）在140 mMβ-巰基乙醇或5 mM DTT（二硫蘇糖醇）中孵育磁珠（30mg/ml）。
a. 在 100 mM Tris-HCl, pH 8.0, 50 mM EDTA, 140 mM β-巰基乙醇條件下，室溫2小時或
者過夜孵育，或者在98℃條件下5分鐘。
b. 在100 mM Tris-HCl, pH 8.0, 50 mM EDTA, 5mM DTT條件下，室溫2小時或者過夜孵
育，或者在98℃條件下5分鐘。
