產(chǎn)品中心
PRODUCT CENTER
鏈酶親和素磁珠
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MMI 105 |
BcMag? 鏈酶親和素磁珠 |
5ml |
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MMI 106 |
BcMag? 鏈酶親和素磁珠 |
10ml |
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如需大量訂購(gòu)，請(qǐng)聯(lián)系我們報(bào)價(jià)！ |
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產(chǎn)品屬性 |
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磁珠大小 |
直徑~ 2.5 μm |
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磁珠密度 |
~10 x 107 beads/mg ( 2.5μm) |
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磁力大小 |
~40-45 EMU/g |
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磁化類型 |
超順磁性 |
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濃度 |
10 mg/ml (10mM Tris, 0.15 M NaCl,0.1% BSA,1 mM EDTA, pH7.4, 0.01% NaN3) |
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結(jié)合能力 |
生物素化BSA / 每毫升磁珠 |
>1mg/ml |
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生物素化單鏈核苷酸 |
~ 2,000 pmoles /ml |
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儲(chǔ)存 |
室溫運(yùn)輸，4℃儲(chǔ)存. 不可冷凍 |
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本款磁珠是一種高度均勻的超順磁性磁珠，表面鏈接有高密度、高純度（>97%）的鏈霉親和素。磁珠是以納米級(jí)超順磁性氧化鐵為核心，由高純度二氧化硅作為外殼包裹，確保氧化鐵不會(huì)發(fā)生浸出問(wèn)題。這款磁珠經(jīng)過(guò)專門設(shè)計(jì)和測(cè)試，可用于免疫沉淀、細(xì)胞分選以及從細(xì)胞裂解物或雜交反應(yīng)中快速捕獲目標(biāo)分子，如DNA、RNA、抗體或蛋白質(zhì)等。
鏈霉親和素（親素多倍體）和生物素之間表現(xiàn)出的相互作用，是已知的最高非共價(jià)相互作用之一。抗生物素、鏈霉親和素、單體抗生物素及其類似物已成為探針和親和配體的有力工具，廣泛應(yīng)用于生化分析、疾病診斷、親和純化和藥物遞送。鏈霉親和素是一種四聚體生物素結(jié)合蛋白，來(lái)源于親和素鏈霉菌，分子質(zhì)量為60000道爾頓。鏈霉親和素不含碳水化合物結(jié)構(gòu)，pI值較低，非特異性結(jié)合程度較低，使鏈霉親和素成為許多檢測(cè)系統(tǒng)的理想選擇試劑。
特點(diǎn)及優(yōu)勢(shì)
鏈霉親和素-生物素結(jié)合系統(tǒng)的優(yōu)勢(shì)和益處
l 極高的親和力：鏈霉親和素是同源四聚體，具有較高的生物素結(jié)合親和力，具有KD～
10?14米。
l 高穩(wěn)定性：生物素結(jié)合復(fù)合物具有良好的穩(wěn)定性，可抵抗極端pH值、溫度（2°C和
40°C）、極端的有機(jī)溶劑環(huán)境、變性劑（如氯化胍）、洗滌劑（如SDS）和
蛋白水解酶。
l 突出的選擇性和特異性：生物素和鏈霉親和素的相互作用具有高度的特異性，可極大降
低非特異性結(jié)合概率。
l 高靈敏度：高穩(wěn)定性和特異性確保了極高的檢測(cè)靈敏度。
l 靈活性：生物素體積小的特點(diǎn)和顯著的穩(wěn)定性被證明非常適用于結(jié)合各種分子，例如
合成聚合物、熒光團(tuán)、與小分子或生物分子中的特定位置結(jié)合，從而對(duì)共軛生物分子的結(jié)構(gòu)和功能施加最小的干擾。
使用鏈霉親和素磁珠的優(yōu)點(diǎn)和益處
l 快速、簡(jiǎn)單、一步式的高通量操作過(guò)程：不需要離心柱或過(guò)濾器，或費(fèi)時(shí)費(fèi)力的重復(fù)移液或離心（圖1）
l 極高的結(jié)合能力
l 非常低的非特異性結(jié)合率
l 可根據(jù)需要調(diào)整反應(yīng)體積的大小，適用于自動(dòng)化操作
操作協(xié)議
所需耗材
l Binding Buffer: 1x PBS, 0.1% BSA, pH 7.4
l 磁力分離器（適用于手動(dòng)操作）：根據(jù)實(shí)驗(yàn)時(shí)生物樣品的體積，使用者可以選擇一下不同型號(hào)的磁力分離器：
BcMag? separator-2可以容納兩個(gè)單獨(dú)的1.5 ml離心管(Cat.# MS-01);
BcMag? separator-6可以容納六個(gè)單獨(dú)的1.5 ml離心管(Cat.# MS-02);
BcMag? separator-24可以容納24個(gè)單獨(dú)的1.5-2.0 ml離心管(Cat.# MS-03);
BcMag? separator-50可以容納一個(gè)單獨(dú)的50 ml離心管，一個(gè)15ml的離心管，以及四個(gè)1.5ml離心管(Cat.# MS-04);
BcMag? separator-96 可以配合96 ELISA板和PCR板使用 (Cat.#MS-05).
操作過(guò)程
提示
l 一下操作過(guò)程是一個(gè)通用的親和純化操作。為了獲得最佳結(jié)果，每個(gè)用戶都應(yīng)該根據(jù)所需要純化的目標(biāo)蛋白確定最佳工作條件。
l 我們強(qiáng)烈建議用戶使用滴定法，根據(jù)粗樣品中目標(biāo)生物素化分子的濃度（基于磁珠結(jié)合能力），優(yōu)化每次使用中添加的磁珠數(shù)量。使用過(guò)多的磁珠會(huì)導(dǎo)致過(guò)高的背景，而使用磁珠的量過(guò)少會(huì)導(dǎo)致產(chǎn)量降低。
1. 將最佳添加量的磁珠轉(zhuǎn)移到離心管中。將離心管放在磁力分離器上1-3分鐘，當(dāng)磁珠完全沉淀時(shí)，去除上清液。
2. 取下試管，用5倍體積的PBS buffer通過(guò)渦漩清洗磁珠30秒。將試管置于室溫下1-3分鐘。將試管放在磁力分離器上1-3分鐘，當(dāng)磁珠完全沉淀時(shí)，去除上清液。
3. 重復(fù)步驟2兩次。
4. 向含有目標(biāo)分子的粗樣品中加入洗滌過(guò)的磁珠，并在室溫或所需溫度下培養(yǎng)1-2小時(shí)（溫度越低，培養(yǎng)時(shí)間越長(zhǎng)）。
提示：強(qiáng)烈建議進(jìn)行滴定實(shí)驗(yàn)以優(yōu)化培養(yǎng)時(shí)間。因?yàn)檩^長(zhǎng)時(shí)間的孵化可能會(huì)導(dǎo)致背景過(guò)
高。
5. 用5倍磁珠體積的PBS buffer或1M NaCl徹底清洗珠（可多次清洗），直到洗脫液在280 nm
處吸光度接近背景水平（OD 280<0.05）。
提示：添加更高濃度的鹽、非離子洗滌劑和還原劑可能會(huì)降低非特異性背景。例如，向
洗滌緩沖液中添加NaCl（濃度為1-1.5 M）、0.1-0.5%的非離子洗滌劑，如Triton X-
100或吐溫20。
問(wèn)題和解決方案
l 如何打破生物素和鏈霉親和素之間的結(jié)合？
生物素和鏈霉親和素之間的化學(xué)鍵結(jié)合力非常強(qiáng)。但它可以在變性條件下斷裂。許多應(yīng)
用不需要從鏈霉親和素中分離生物素。但是，如果用戶需要將生物素與鏈霉親和素分離，請(qǐng)遵循以下建議：
1. 蛋白質(zhì)或者抗體
為了從磁珠中洗脫結(jié)合的生物素化蛋白質(zhì)或抗體，可向磁珠中添加適量的洗脫緩沖液（0.1 M
甘氨酸HCl，pH 2.5），在室溫下培養(yǎng)0.5-5分鐘，通過(guò)磁力分離器去除磁珠，并將上清液轉(zhuǎn)移到新試管中。通過(guò)添加1/10體積的中和緩沖液（1.0 M Tris-HCl，pH 9.0），立即將上清液中和至pH 7.0。
2.DNA
由于洗脫較困難，不推薦使用長(zhǎng)鏈核酸作為生物素化探針進(jìn)行洗脫。對(duì)于短的生物素化
核酸洗脫，用戶可以嘗試以下方法：
A. 為了從磁珠中洗脫結(jié)合的生物素化低聚物，添加適量的洗脫緩沖液（10mM EDTA，
pH 8.2，95%甲酰胺），在65℃下培養(yǎng)2分鐘。
B. 通過(guò)磁力分離器清除磁珠，并將上清液轉(zhuǎn)移到新試管中。
l 如何從磁珠中洗脫結(jié)合的非生物素化樣品？
1.蛋白質(zhì)或者抗體
如果非生物素化的蛋白質(zhì)或抗體與生物素化的抗體或蛋白質(zhì)相互作用，則添加適量的洗
脫緩沖液（0.1 M甘氨酸-HCl，pH 2.5），在室溫下培養(yǎng)30秒-5分鐘，通過(guò)磁力分離器去除磁珠，并將上清液轉(zhuǎn)移到新試管中。通過(guò)添加1/10體積的中和緩沖液（1.0 M Tris-HCl，pH9.0），立即將上清液中和至pH7.0。
2.DNA或者RNA
生物素化DNA或RNA是一種短寡聚體探針。可通過(guò)添加適量d2H2O并在65-70℃下加熱3-5分鐘來(lái)洗脫結(jié)合的非生物素化DNA或RNA。通過(guò)磁力分離器去除磁珠，并將上清液轉(zhuǎn)移到新試管中。生物素化的DNA或RNA是大片段時(shí)，可通過(guò)添加適量d2H2O并在95℃下加熱3-5分鐘來(lái)洗脫結(jié)合的非生物素化DNA。通過(guò)磁力分離器去除磁珠，并將上清液轉(zhuǎn)移到新試管中。
