產品中心
PRODUCT CENTER
一步法抗體純化試劑盒
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Cat. No. |
Product Name |
Unit Size |
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EB101 |
BcMag? One-Step Antibody Purification Kit |
2 ml |
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EB102 |
BcMag? One-Step Antibody Purification Kit |
10 ml |
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簡介
BcMag? 一步式抗體純化試劑盒專為從人類、小鼠、大鼠、兔子、山羊、馬、豚鼠、豬、倉鼠和驢等血清中快速小規模高通量純化各種IgG種類而設計。與傳統的結合-洗滌-洗脫親和純化方法不同，BcMag? 一步法抗體純化試劑盒通過清除血清中大量存在的非相關蛋白質，將抗體與血清分離。一步法抗體純化磁珠可以結合血清中的非抗體蛋白質（如白蛋白和轉鐵蛋白），使抗體溶解在適和的緩沖液中通過磁珠，便于存儲和下游應用。如果血清樣品未溶血，可以直接將其應用到磁珠上，無需進行硫酸銨沉淀。
一步法抗體純化試劑盒解決了常用的將蛋白A和蛋白G固定在固相載體上的純化方法的缺點。使用蛋白A和蛋白G親和技術可以選擇性地結合IgG種類和亞類。這種技術通常非常耗時且繁瑣，需要采用極端的洗脫條件來破壞親和鏈接。純化后的抗體通常需要透析或去鹽處理后，才能存儲或用于下游應用。一步法抗體純化技術不需要洗脫步驟，而是在生理pH下使用適中的純化緩沖液。此外，由于純化后的抗體處于不含伯胺基的緩沖液中，因此可以直接用于胺基反應的結合化學反應。
磁珠產品與傳統色譜法如純化柱、瓊脂糖或非磁性樹脂相比具有顯著優勢。基于磁珠的特性可以在約20分鐘內快速高產率處理96個樣品，不同IgG種類抗體純化產物獲得超過80％純度和超過90％回收率。當使用基于色譜柱的技術實驗時，在科學研究實驗室處理多個樣品時，可能需要大量的手動移液操作。這種移液操作會造成實驗和人之間目標生物分子產量的差異。實驗人員和學生可能需要大量的培訓和實踐才能產生恒定的蛋白質產量。而且磁珠具有許多優點，例如它們易于使用，快速的實驗方案，適用性以及高通量自動化和小型化處理的便利性等。
產品特點和優勢：
? 高效 - 回收率超過90％，純度超過85％。
? 快速純化 - 一步法手動或一步法高通量操作。
? 便捷 -無需使用純化柱、過濾器，且不需要繁瑣的移液或離心操作。
? 不含胺基緩沖液 - 無需進行去除或中和操作。
? 結合力強 - 適用于對蛋白A或蛋白G結合能力較差的IgG亞類。
? 溫和 - 無需苛刻的抗體洗脫條件，有助于保持IgG的活性。
? 可再生 - 磁珠可重復使用，可進行多達3次純化。
工作流程（圖1）：
向血清中加入磁珠。
通過慢速上下移液25次（一分鐘）或旋轉混勻器混合樣品。
磁分離非抗體血清蛋白結合的磁珠，從而獲得純抗體。
將上清轉移到一個新的試管中。
操作步驟：
提示：
? 以下 操作方案為示例。磁珠和樣品體積可進行合理的放大或縮小。
? 每40μl磁珠可做用于3μl血清。磁珠用量少會產生雜質。使用過多的磁珠可能會降低目標抗體的產量。血清中的IgG水平通常為10-15mg/ml，但結果可能因物種和樣品制備而異。
? 使用磁珠純化后的樣品中可能存在轉鐵蛋白，包括小鼠和大鼠血清樣品。這些物種的轉鐵蛋白具有各種性質，不會像其他物種的轉鐵蛋白那樣會和磁珠發生反應。純化前，進行硫酸銨沉淀，可以降低轉鐵蛋白的存在。
儀器要求
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Item |
Source |
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磁力分離器
**根據樣品體積，用戶可以選擇以下磁力分離器之一 |
l BcMag? separator-2 適用于兩個單獨的1.5毫升離心管 (Bioclone, Cat.# MS-01); l BcMag? separator-6 適用于六個單獨的1.5毫升離心管 (Bioclone, Cat.# MS-02); l BcMag? separator-24 適用于24個單獨的1.5-2.0 ml離心管 (Bioclone, Cat.# MS-03); l BcMag? separator-50 適用于1個單獨的50毫升離心管，1個單獨的15毫升離心管, 以及4個 1.5毫升 離心管 (Bioclone,Cat.# MS-04）
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BcMag 96孔磁力分離器 |
l BcMag 96-well Plate Magnetic Separator (side-pull,) 或者 96-well PCR plate 和 96-well microplate, 或其他兼容的磁力分離器(Blioclone, Cat#: MS-06) |
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可調單通道和多通道移液器 |
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擺斗離心機 |
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如果使用96孔PCR板/管，則需要添加項目 |
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渦懸混合器 **用戶還可以使用其他型號的渦懸混合器。但是，時間和速度應進行優化，并且混合器應滿足: 扭矩 ≥1.5 mm-4 mm, 轉速 ≥ 2000 rpm |
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Eppendorf? MixMate? |
Eppendorf, Cat#:5353000529 |
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Tube Holder PCR 96 |
Eppendorf, Cat#: 022674005 |
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Tube Holder 1.5/2.0 mL, for 24?×?1.5 mL or 2.0 mL |
Eppendorf, Cat#: 022674048 |
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Smart Mixer, Multi Shaker |
BenchTop Lab Systems, Cat#:5353000529 |
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1.5/2.0 mL 離心管 |
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96孔PCR板或者 8孔 PCR 管 |
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PCR 板/管 ** IMPORTANT! 如果使用其他管或PCR板，確保PCR管或PCR板錐形部分底部的井徑必須≥2.5毫米。 |
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如果使用96孔微孔板需要添加的設備 |
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Fisher Scientific? Microplate Advanced Vortex Mixers |
Fisher, Cat#:02-216-101 |
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OHAUS Microplate Vortex Mixers |
OHAUS, Cat#:30392160 |
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渦懸混合器 **用戶還可以使用其他型號的渦懸混合器。但是，時間和速度應進行優化，并且混合器應滿足: 扭矩 ≥1.5 mm-4 mm, 轉速 ≥800 rpm |
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平底透明的非結合型分析微孔板 |
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實驗步驟
重要提示：
? 以下方案針對3μl血清樣品的高效純化進行的優化。如果進行其他反應，則可能需要進行程序優化。
? 在使用前，搖晃或渦旋混合試劑瓶，完全重懸磁珠。
? 不要讓磁珠靜置超過兩分鐘。
1.將40μl磁珠轉移到新的96孔PCR板、96孔微孔板或0.2ml PCR管的孔中，并加入3μl血清。
2.通過緩慢上下移液25次（一分鐘）或旋轉混勻器以2000rpm的速度混合磁珠和樣品。
3.將樣品板/管放在磁力分離板上，靜置30秒至1分鐘，直至磁珠完全分離并沿管壁靠近板底部。期間，磁珠將被磁力架吸附到磁力架上，而上清液將保留在樣品管中。
4.使用多通道或單通道移液器，小心地從樣品板/管中取出上清液，避免吸取到磁珠。
5.將上清液轉移到新的96孔PCR板、96孔微孔板或其他目標容器中。至此，抗體已被高效純化。
請注意，以上步驟僅為示例，并假定您使用了Bioclone的BcMag? 一步式抗體純化試劑盒。實際操作時，請根據試劑盒的使用說明進行操作，并注意確保實驗操作在無菌環境下進行。
附加信息：
磁珠再生
1.如果必須再生磁珠，則需添加50μL 5M NaCl，并通過緩慢上下吹吸移液25次（1分鐘）或通過渦流混合器在2000 rpm下攪拌5分鐘，將磁珠與樣品混合。將樣品板/試管放在磁性分離板上30秒或直到溶液澄清。丟棄上清液。
2.重復步驟1五次。
3.用40μl 25mM MES，PH6.5重新懸浮磁珠，并在4°C下儲存。磁珠可以被再生三次而不會失去實質上的選擇性。
問題與建議
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問題 |
可能原因 |
建議 |
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純化抗體的產量太低或檢測不到 |
樣品中抗體的含量太低 |
? 使用其他方法，如ELISA或同類型試劑盒，確保樣品含有IgG。 |
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樣品中抗體未與磁珠結合 |
? 確保樣品緩沖液中的 pH值在 6.5 - 7.0范圍內. |
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觀察到染色的SDS-聚丙烯酰胺凝膠上存在多條條帶 |
樣品中含有大于25mM的鹽，同時pH值可能不是中性的。 |
? 使用低鹽中性緩沖液對樣品進行透析。 ? 確保樣品緩沖液中的 pH值在 6.5 - 7.0范圍內. |
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純化出大量抗體。然而，沒有發現目標抗體 |
目標抗體濃度太低 |
? 利用活性親和磁珠和特異性抗原純化抗體。 |
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純化的IgG被染色 |
對血清樣品進行溶血。 |
溶血的消除
以下操作可用于減少或消除血清樣品中的溶血。 ?在抗凝血劑存在的情況下采集血液并離心以去除紅細胞。
?謹慎采血，避免溶血。
?收集間質液而不是血液。 |
