產品中心
PRODUCT CENTER
快速 HSA/IgG 清除試劑盒
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貨號 |
產品名稱 |
產品規格 |
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BF101 |
BcMag? 快速 HAS 和 IgG 清除試劑盒 |
25x次 |
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BF102 |
BcMag? 快速 HAS 和 IgG清除試劑盒 |
100x 次 |
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產品特性 |
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組成 |
表面連接有專有化學基團的，改性的磁珠 |
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磁力大小 |
~60 EMU/g |
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磁力類型 |
超順磁性 |
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有效密度 |
2.5 g/ml |
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濃度 |
30 mg/ml (超純水 ) |
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結合能力 |
10μl serum /20μl of Beads |
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儲存條件 |
收到后，4°C保存 |
血清和血漿經常用于臨床和藥物蛋白質組學研究中，用來發現治療靶點的早期診斷生物標志物。對于這些體液生物我們可以非常容易的，無創獲得，但它們其中含有一些大量的無關蛋白質，會掩蓋了少量存在的需要研究的蛋白質成分。發現血清生物標志物的問題在于，如何清除大量不管蛋白的影響，同時發現和富集低豐度的蛋白質。大量表達的蛋白質，如白蛋白和IgG，占血清/血漿總蛋白質的70%。而蛋白質生物標記物的含量則要低得多（pg/ml）。高豐度蛋白質會隱藏需要研究的低豐度蛋白質，對一維和二維電泳、高效液相色譜和質譜分析等分析實驗造成影響。高豐度蛋白質必須有效、可重復并明確地從血液樣本中去除掉，才可以正確的檢測低豐度蛋白質。因此，在進行蛋白質組分析之前，特別是使用質譜法時，有必要從人體樣品（如血漿、血清、尿液或腦脊液）中選擇性去除白蛋白。
雖然親合染料配體Cibacron Blue F3GA可以共價結合到商用載體上，用于從水溶液和人血漿中吸附HSA，但它的選擇性結合能力較差。在免疫親和系統中，也使用抗白蛋白抗體對HSA進行結合。蛋白A通常用于去除IgG。這些技術通常具有較好的特異性，但成本高昂。此外，由于這些方法中有許多是基于瓊脂糖樹脂或其衍生結合柱進行實驗，因此，它們富集含量較低的蛋白質的過程非常耗時，無法在短時間內處理大量樣品，并且難以適應自動化系統。同時，根據實驗要求，有時需要增加樣品體積來進行實驗研究，這就需要額外的蛋白質濃縮步驟。這就需要具有提高效率、均勻性和吞吐量的，新白蛋白去除方法來解決上述問題。
BcMag? Quick HSA/IgG Depletion Kit是基于我們獨特的磁珠，經過我們專有的化學修飾，可快速簡便地從血清和血漿樣品中去除白蛋白和IgG。在特定緩沖液條件下，磁珠與樣品中的所有其他蛋白質（白蛋白和IgG除外）結合，并可以通過結合和釋放除白蛋白以外的所有含量較低的蛋白質，達到去除白蛋白和IgG目的。 富集和洗脫下來的蛋白質可用于下游應用，如蛋白質組分析、生物標志物檢測、酶分析、SELDI分析、蛋白質陣列像素化、1維和2維凝膠電泳、LC/MS和MALDI-TOF MS。
工作流程（圖1）
如圖1所示，白蛋白清除試劑盒的操作流程非常簡單。將磁珠與血清或血漿樣品混合，并連續旋轉培養。在混合期間，磁珠保持懸浮在樣品溶液中，這樣就使樣品中的所有其他蛋白質（白蛋白和IgG除外）可以充分結合到磁珠上。孵育后，收集磁珠，使用磁力分離器從樣品中將磁珠分離出來。然后洗脫結合的蛋白質。
特點和優勢
l 快速、簡單、無需純化柱、離心機或過濾器。
l 去除90%以上的白蛋白和95%的 IgG
l 高通量：在30分鐘內快速處理多達96個樣品
l 低豐度蛋白富集效果相當于或者優于 hexapeptides 或者 antibodies
l 溫和的洗脫條件保留了蛋白的三級結構，并允許輕松的轉移到二級結構分析。
l 可根據需求調整試驗樣品體積大小，便與自動化操作。
l 最小的樣品稀釋程度
適用于LC-MS、基于活性的蛋白質分析和蛋白質組學研究。
操作協議
提示：
· 以下協議僅是一個示例。血清中的蛋白質濃度可能不同。10ul人血清含有約700μg的完整蛋白質。這些蛋白中，約70%為人血清白蛋白。每個實驗中使用的血清量應由用戶優化。系統過載可能導致白蛋白被攜帶到低豐度蛋白質組分中。使用給定的方案，用戶在試驗時可清除掉50-100g血清蛋白。
· 樣品在含鹽緩沖液中洗脫，可能需要在電泳或質譜分析之前進行脫鹽。但是，如果樣品在分析前已經充分稀釋，則可能不需要脫鹽。
材料要求
l BcMag? Quick Albumin Removal magnetic beads
l 1x Binding/Washing Buffer: 20 mM 磷酸鈉, pH 6.5,
l 1x Elution Buffer: 100 mM甘氨酸-HCl, pH 2.7
儀器要求
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Item |
Source |
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磁力分離器
**根據樣品體積，用戶可以選擇以下磁力分離器之一 |
l BcMag? separator-2 適用于兩個單獨的1.5毫升離心管 (Bioclone, Cat.# MS-01); l BcMag? separator-6 適用于六個單獨的1.5毫升離心管 (Bioclone, Cat.# MS-02); l BcMag? separator-24 適用于24個單獨的1.5-2.0 ml離心管 (Bioclone, Cat.# MS-03); l BcMag? separator-50 適用于1個單獨的50毫升離心管，1個單獨的15毫升離心管, 以及4個 1.5毫升 離心管 (Bioclone,Cat.# MS-04）
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BcMag 96孔磁力分離器 |
l BcMag 96-well Plate Magnetic Separator (side-pull,) 或者 96-well PCR plate 和 96-well microplate, 或其他兼容的磁力分離器(Blioclone, Cat#: MS-06) |
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可調單通道和多通道移液器 |
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擺斗離心機 |
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如果使用96孔PCR板/管，則需要添加項目 |
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渦懸混合器 **用戶還可以使用其他型號的渦懸混合器。但是，時間和速度應進行優化，并且混合器應滿足: 扭矩 ≥1.5 mm-4 mm, 轉速 ≥ 2000 rpm |
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Eppendorf? MixMate? |
Eppendorf, Cat#:5353000529 |
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Tube Holder PCR 96 |
Eppendorf, Cat#: 022674005 |
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Tube Holder 1.5/2.0 mL, for 24?×?1.5 mL or 2.0 mL |
Eppendorf, Cat#: 022674048 |
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Smart Mixer, Multi Shaker |
BenchTop Lab Systems, Cat#:5353000529 |
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1.5/2.0 mL 離心管 |
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96孔PCR板或者 8孔 PCR 管 |
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PCR 板/管 ** IMPORTANT! 如果使用其他管或PCR板，確保PCR管或PCR板錐形部分底部的井徑必須≥2.5毫米。 |
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操作過程
提示
l 用力震蕩試劑瓶，直到磁珠變得均勻。
l 在分液前，不要讓磁珠靜置超過5分鐘。
1. 將40μl磁珠轉移到新試管或新的96孔PCR板、微孔板或0.2ml PCR管中，并將50μl的 binding buffer添加到反應管中，使最終反應體積為90μl。
2. 添加10μl血清樣品，通過緩慢上下移液20-25次將樣品與磁珠混合，或以2000 rpm旋轉樣品5min（見圖）。
3. 將反應的反應板/試管放在磁力分離器上30s或直到溶液澄清。
4. 將反應管保留在磁力分離器上的同時，去掉上清液。
5. 用100μL的binding buffer清洗磁珠，通過緩慢上下移液20-25次，或以2000 rpm旋轉樣品2分鐘的方式。將反應的反應板/試管放在磁力分離器上30s或直到溶液澄清。
6. 重復步驟5一次
7. 將磁珠重新懸浮在50-100μl的Elution Buffer中，通過緩慢上下移液20-25次將樣品與磁珠混合，或以2000 rpm旋轉樣品5分鐘。
8. 將上清液轉移到新的微量離心管或微量滴定板中。含有目標蛋白的上清液即可用于下游應用。
