產(chǎn)品中心
PRODUCT CENTER
碘代乙酰基銪熒光磁珠
|
Cat. No. |
Product Name |
Unit Size |
|
|
|
GM101 |
2.5 μm BcMag? Iodoacetyl-Activated Europium Fluorescence Magnetic Beads |
15 mg |
|
|
|
GM102 |
2.5 μm BcMag? Iodoacetyl-Activated Europium Fluorescence Magnetic Beads |
30 mg |
|
|
|
GM103 |
5 μm BcMag? Iodoacetyl-Activated Europium Fluorescence Magnetic Beads |
15 mg |
|
|
|
GM104 |
5 μm BcMag? Iodoacetyl-Activated Europium Fluorescence Magnetic Beads |
30 mg |
|
|
|
|
||||
|
Fluorophore |
Fluorescence color |
Excitation (nm) |
Emission (nm) |
Fluorescence lifetime (?) (μsec) |
Stokes shifts (nm) |
Selection of Emission Filter |
|
Europium ion (Eu3+) |
Red |
340 |
615 |
730 |
275 |
620/40 |
|
產(chǎn)品屬性 |
||
|
磁珠大小 |
2.5μm 直徑; 或5μm直徑 |
|
|
磁珠數(shù)量 |
~1.47 x 108 beads/mg (2.5μm) ~ 5 x 107 beads /mg (5μm) |
|
|
穩(wěn)定性 |
短期保存 (<1 hour): pH 3-11; 長期保存: pH 4-10 溫度: 4°C -140°C; 大多數(shù)有機溶劑 |
|
|
磁力大小 |
~40-45 EMU/g |
|
|
磁力類型 |
超順磁性 |
|
|
狀態(tài) |
凍干粉 |
|
|
功能團密度 |
2.5μm Magnetic Beads |
~195 μmole / g of Beads |
|
5μm Magnetic Beads |
~180 μmole / g of Beads |
|
|
儲存 |
收到后-20℃保存 |
|
BcMag ? 碘代乙酰基銪熒光磁珠是在表面連接高密度碘代乙酰基官能團的時間分辨熒光（TRF）磁性微球。本款磁珠結(jié)合了預(yù)活化的碘代乙酰基團、時間分辨熒光染料和磁力特性的優(yōu)勢，可以進行非常敏感的分析。磁珠的制造采用了納米級超順磁性氧化鐵和銪金屬作為核心，并完全封裝在高純度二氧化硅外殼中，確保不會出現(xiàn)氧化鐵和銪金屬的溶出問題。親水表面確保磁珠的非特異性吸附低，分散性好，易于在各種緩沖液中處理。
它可以通過與巰基（-SH）反應(yīng)快速，高效的共價固定蛋白質(zhì)，多肽和其他配體，用于親和純化實驗。在堿性生理環(huán)境（pH 7.2--9）下，在含有20-30%DMSO或DMF的水性或有機溶劑中，碘代乙酰基活化的載體與巰基反應(yīng)，產(chǎn)生穩(wěn)定的硫醚鍵。這些反應(yīng)通常在黑暗環(huán)境下進行，以防止游離碘的形成，因為游離碘可與酪氨酸，組氨酸和色氨酸殘基反應(yīng)（圖1）。親水表面可確保磁珠的非特異性吸附低，分散性好，便于在各種緩沖液中操作。
通過氨基以外的官能團固定親和配體，對實驗也是非常有幫助的。特別是使用硫醇基團，非常適用于引導(dǎo)特定蛋白質(zhì)分子上結(jié)合位點，或活性中心距離較遠(yuǎn)的偶聯(lián)過程。
半胱氨酸經(jīng)常通過二硫鍵（-S-S-）在其側(cè)鏈之間結(jié)合，作為蛋白質(zhì)二級或三級結(jié)構(gòu)的一部分。半胱氨酸的側(cè)鏈含有巰基（-SH）（Cys，C）。這些基團必須在固定之前轉(zhuǎn)化為巰基。巰基（巰基）可以在蛋白質(zhì)中天然存在，也可以通過還原二硫化物引入或使用各種硫醇化試劑引入。
盡管傳統(tǒng)的熒光顯色技術(shù)在過去幾十年中得到了廣泛應(yīng)用，但它們在適用性和效率方面仍存在一些局限性：1.激發(fā)帶較窄，背景信號強。2.斯托克斯位移較小，容易造成自熄現(xiàn)象。3.熒光對環(huán)境因素敏感，如金屬離子濃度、pH值、溫度和溶劑極性。4.熒光強度不足，不能檢測單個生物分子。5.熒光間歇性（閃爍）影響分子檢測的某些數(shù)據(jù)處理過程，造成誤差。6.由于疏水性，容易聚集。
BcMag? TR-FRET測定方法與傳統(tǒng)的FRET（F?rster共振能量轉(zhuǎn)移）測定方法不同，它利用時間分辨熒光磁珠（BcMag? TR-Magnetic Beads）作為熒光供體團。供體和受體可以是兩個蛋白質(zhì)、兩個DNA鏈、抗原、抗體或配體或其它受體。在一定的時間延遲后（通常為50至100秒），當(dāng)供體和受體分子靠近并以時間分辨方式進行監(jiān)測時，通過熒光共振能量轉(zhuǎn)移產(chǎn)生信號。在BcMag? TR-FRET測定方法中，微量的分析物可以通過時間分辨磁珠輕松地從樣品中富集，從而提高靈敏度。該測定方法消除了由樣品和塑料微孔板引起的所有熒光背景影響，以及直接激發(fā)受體所產(chǎn)生的背景影響。因此，BcMag? TR-FRET測定方法的信噪比非常高，背景值非常低。此外，該測定方法不需要清洗步驟。BcMag? TR-FRET測定方法在高通量篩選的生物分析中具有顯著的優(yōu)勢，如測定靈活性、可靠性、提高測定靈敏度、更高的通量和更少的假陽性/假陰性結(jié)果。
由于其獨特的特性，銪熒光團是一種高效的時間分辨熒光標(biāo)記。它在340nm處激發(fā)，發(fā)出615nm的紅色熒光，具有長熒光壽命（730微秒）和較大的斯托克斯位移（275nm）。利用這些特性，時間分辨熒光檢測可以顯著降低樣品的熒光背景，并提高信噪比，使其比傳統(tǒng)熒光染料具有更高一個數(shù)量級的檢測能力。BcMag? 碘代乙酰基銪熒光磁珠是TR-FRET測定中優(yōu)秀的供體材料。
TR-FRET磁珠測定方法的工作流程（圖2）
1.將與抗體結(jié)合的供體磁珠與細(xì)胞裂解液混合，并在連續(xù)旋轉(zhuǎn)下孵育足夠的時間。在混合過程中，磁珠保持懸浮在樣品溶液中，使目標(biāo)分析物能夠與供體磁珠結(jié)合。2. 孵育后，使用磁力架將磁珠從樣品中收集和分離。3. 添加與目標(biāo)分析物結(jié)合的受體，并在連續(xù)旋轉(zhuǎn)下孵育足夠的時間。4. 多種微孔板讀數(shù)儀進行TR-FRET測定。
優(yōu)勢和特點：
1. 本款磁珠具有在一種磁珠上，可以同時表現(xiàn)出雙重功能的特點：分離/預(yù)濃縮和檢測分析物，能夠在同一磁珠上快速、簡便、穩(wěn)定和高通量地從復(fù)雜生物樣品中分析痕量分析物。
2. 超高的靈敏度。檢測限值低至10 pg/mL，而典型熒光測定的檢測限值為100 pg/mL。
3. 極高的光穩(wěn)定性和耐光漂白性。所有的鑭系螯合物或香豆素分子以及氧化鐵完全封閉在磁珠的內(nèi)部，而不僅僅是在磁珠表面上。這種保護環(huán)境可以防止氧化鐵和染料溶解到水介質(zhì)中，使磁珠對溶劑、溫度、pH等外部條件的敏感性降低。
4. 高熒光強度。由于單個磁珠含有高濃度的鑭系螯合物，并且鑭系螯合物本身具有40%到90%的高量子產(chǎn)率，因此磁珠具有超強的熒光強度，可顯著提高分析靈敏度，而無需信號放大。這種高亮度的磁珠也是時間分辨FRET分析的完美供體。
5. 鑭系螯合物或香豆素具有較大的斯托克斯位移（>250nm）、較窄的發(fā)射帶（-10nm帶寬）和較長的熒光壽命（μs），這大大降低了背景影響并提高了信號和干擾信號的比例。
6. 大多數(shù)生物檢測過程的ELISA測定可以轉(zhuǎn)化為HTRF測定。
7. 測定過程中無需清洗步驟。
8. 磁珠具有親水性二氧化硅表面，通過具有不同長度連接劑的不同功能基團進行接合，可高效地結(jié)合多種配體，如多肽、蛋白質(zhì)、抗體、小分子、碳水化合物、寡核苷酸、DNA/RNA等。
9. 由于磁珠的磁性特性，熒光磁珠非常適合于高通量自動化。
